1. Ponte las gafas de seguridad y los guantes.
2. Golpee suavemente la botella de -amilasa para que el polvo se acumule en el fondo del recipiente.
3. Retire con cuidado tanto la tapa como la punta de la botella y reserve.
4. Use el cilindro graduado de 25 ml para medir y agregue 12,0 ml de agua destilada a la botella.
5. Regrese la punta y la tapa a la botella y agite vigorosamente hasta que se mezcle el contenido.
6. Cree un bao de agua caliente con el combustible del quemador, el soporte del quemador y el vaso de precipitados de vidrio de 250 ml.
7. Mientras se calienta el agua, use el marcador permanente para etiquetar tres tubos de ensayo como "almidn" y otros tres tubos de ensayo como "amilasa".
8. Coloque los seis tubos de ensayo en pocillos vacos de la placa de 24 pocillos, utilizando la placa de pocillos como soporte para tubos de ensayo.
9. Agregue 4 gotas de solucin de almidn al 1% a cada uno de los tubos de ensayo de almidn.
10. Agregue 4 gotas de solucin de -amilasa a cada uno de los tubos de ensayo de amilasa.
11. Apague la llama del quemador una vez que el agua alcance el punto de ebullicin.
12. Coloque con cuidado un tubo de ensayo de almidn y un tubo de ensayo de amilasa en el bao de agua. Consulte la figura 8.

Tratamiento de bao de agua caliente.

1. Permita que los tubos permanezcan en el bao de agua durante 5 minutos.
2. Durante el perodo de 5 minutos, use el termmetro para medir la temperatura del agua y regstrela en la Tabla de datos 2 .
3. Despus de 5 minutos, vierta con cuidado el contenido del tubo de ensayo de -amilasa en el tubo de ensayo de almidn y vuelva a colocar el tubo de ensayo de almidn en el bao de agua.
4. Permita que la solucin de enzima y almidn reaccione durante 1 minuto.
5. Despus de 1 minuto, use una pipeta limpia para agregar 1 gota de indicador IKI al tubo de ensayo e inmediatamente observe el color de la solucin.
6. Anota tus observaciones del color de la solucin inicial en la Tabla de datos 2 .
7. Compare el color de la solucin en el tubo de ensayo con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidn.

Resultados de IKI para la prueba de almidn. Las soluciones grises, marrones o negras indican la presencia de almidn. Las soluciones claras de color mbar indican la ausencia de almidn.

1. Registre la presencia o ausencia de almidn en la Tabla de datos 2 .
2. Retire el tubo de ensayo de almidn del bao de agua y colquelo en posicin vertical en un pocillo vaco en el lado izquierdo de la placa de 24 pocillos.
3. Deje que el bao de agua caliente se enfre por debajo de 40C.
4. Retire con cuidado el vaso de precipitados de 250 ml del soporte del quemador y deseche el agua.
5. Cree un bao de agua a 37 C en el vaso de precipitados de 250 ml.

Nota: Puede usar agua tibia de un grifo o del quemador para crear el bao de agua. Solo es importante que el agua est a 37C.

1. Repita los pasos 12-20 usando el bao de agua a 37C.
2. Retire el tubo de ensayo de almidn del bao de agua y colquelo en posicin vertical en un pocillo vaco en la fila central de la placa de 24 pocillos.
3. Deseche el agua del vaso de precipitados.
4. Crea un bao de hielo en el vaso de precipitados de 250 ml llenndolo hasta la mitad con hielo picado y agua fra del grifo.
5. Repita los pasos 12 a 20 usando el bao de hielo.
6. Retire el tubo de ensayo de almidn del bao de agua y colquelo en posicin vertical en un pocillo vaco en el lado derecho de la placa de 24 pocillos.
7. Deje que los tres tubos de ensayo permanezcan en la placa de pocillos a temperatura ambiente durante 10 minutos.
8. Despus de 10 minutos, observe las soluciones en cada tubo y registre el color de la solucin final en la Tabla de datos 2 .
9. Compare el color de la solucin en el tubo de ensayo con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidn.
10. Registre la presencia o ausencia de almidn en la Tabla de datos 2 .
11. Retire los tubos de ensayo y limpie la placa de pocillos para usar en la Parte 2.

Parte 2: Efectos del pH

1. Escriba la fecha de su nombre en una nueva hoja de papel.
2. Coloque la placa limpia de 24 pocillos en la hoja de papel que contiene su nombre y fecha.
3. Etiquete la hoja 1-4 debajo de los cuatro pocillos inferiores.
4. Utilice el marcador permanente para etiquetar cuatro pipetas limpias "tampn de pH 3,5", "tampn de pH 5,0", "tampn de pH 6,8" y "tampn de pH 11,5".
5. Retire las puntas de los goteros de cada una de las botellas de solucin tampn y extraiga las soluciones en las pipetas correctamente etiquetadas.
6. Coloque cada pipeta con el bulbo hacia abajo en pocillos vacos de la placa de 24 pocillos, utilizando la placa de pocillos como soporte para pipetas. Consulte la figura 10.

Configuracin de pH.

1. Agregue las siguientes soluciones en el orden indicado a los pocillos etiquetados:
   • Pozo 1: agregue 6 gotas de tampn de pH 3.5, 2 gotas de solucin de -amilasa y luego 2 gotas de solucin de almidn al 1%.
   • Pozo 2: agregue 6 gotas de tampn de pH 5.0, 2 gotas de solucin de -amilasa y luego 2 gotas de solucin de almidn al 1%.
   • Pozo 3: agregue 6 gotas de tampn de pH 6.8, 2 gotas de solucin de -amilasa y luego 2 gotas de solucin de almidn al 1%.
   • Pocillo 4: aadir 6 gotas de tampn de pH 11,5, 2 gotas de solucin de -amilasa y luego 2 gotas de solucin de almidn al 1 %.
2. Permita que cada una de las reacciones ocurra durante 1 minuto.
3. Despus de 1 minuto, agregue 1 gota de indicador IKI a las soluciones en cada pocillo.
4. Observe el color de las soluciones en cada pocillo y regstrelo en la Tabla de datos 3 .
5. Compare los colores de las soluciones en los pozos con las soluciones en la Figura 9 para determinar la presencia de almidn.
6. Registre la presencia o ausencia de almidn en cada pocillo en la Tabla de datos 3 .
7. Tome una foto de la placa de pocillos que muestre las soluciones en cada pocillo y su nombre y fecha en la hoja de papel.
8. Sube la imagen a la Foto 2 .

Limpiar:

• Deseche correctamente las soluciones en la placa de pocillos y las pipetas qumicas usadas.
• Limpie todo el equipo de laboratorio con agua y jabn y djelo secar completamente.
• Devuelva los artculos limpios y secos al kit de laboratorio para uso futuro.

Tabla 2

Tepratura Color de la solucin inicial Color de la solucin inicial Color de la solucin final Almidn presente-final (S/N)

CALIENTE 91C Amarillo - Verde Y Verde Y

37C 37 C Amarillo N Amarillo N

HIELO 3 C Naranja - Amarillo N Amarillo N

Tabla 3

pH Color Almidn presente (S/N)

3.5 Naranja Y

5.0 Naranja Y

6.8 Amarillo N

11.5 Negro Y

Ejercicio 2 - Preguntas

Pregunta 1

1. Describe la relacin entre la temperatura y la actividad enzimtica de la -amilasa.

a. De las tres temperaturas probadas, cul es la temperatura ptima para la actividad enzimtica?

b. Alguna de las temperaturas hizo que la enzima se desnaturalizara?

Explique su respuesta haciendo referencia a sus resultados en la Tabla de datos 2.

• Pregunta 2

2. Cul es el rango de pH para la actividad de la -amilasa? Alguno de los niveles de pH hizo que la enzima se desnaturalizara? Explique su respuesta haciendo referencia a sus resultados en la Tabla de datos 3 y la Foto 2.

Pregunta 3

3. Sus resultados sobre los efectos de la temperatura y el pH en la actividad de la -amilasa respaldan la digestin del almidn que se produce en la boca y los intestinos, pero no en el estmago de los seres humanos? Explique sus resultados haciendo referencia a sus datos y la temperatura y el pH de la boca, el estmago y el intestino delgado.